政策标準
食用(yòng)菌菌種生産技術規程
食用(yòng)菌菌種,食用(yòng)菌菌絲,菌種檢驗室,滅菌室,接種箱
前 言
食用(yòng)菌菌種生産技術是否規範直接影(yǐng)響菌種的(de)質量 ，從而影(yǐng)響食用(yòng)菌産品的(de)質量。我國食用(yòng)菌菌種生産采用(yòng)母種、原種、栽培種的(de)三級繁育程序。爲了(le)實現食用(yòng)菌菌種生産技術規範化(huà)，确保菌種質量.維護菌種生産者、經營者和(hé)使用(yòng)者的(de)合法權益，特制定本标準。
本标準的(de)附錄A、附錄B均爲規範性附錄。
本标準由農業部種植業管理(lǐ)司提出。
本标準起草(cǎo)單位:中國微生物(wù)菌種保藏管理(lǐ)委員(yuán)會農業微生物(wù)中心、中國農業科學院土壤肥料研究所、農業部食用(yòng)菌産品質量監督檢驗測試中心(上海)。
本标準主要起草(cǎo)人(rén):張金霞、賈身茂、王南(nán)、左雪(xuě)梅、申進文。
食用(yòng)菌菌種生産技術規程
1 範 圍
本标準規定了(le)各種食用(yòng)菌各級菌種生産的(de)生産場(chǎng)地、廠房(fáng)設裏和(hé)布局、設備設施、使用(yòng)品種、生産工藝流程、技術要求和(hé)貯存運輸要求。
本标準适用(yòng)于各種各級食用(yòng)菌菌種生産。
2 規範性引用(yòng)文件
下(xià)列文件中的(de)條款通(tōng)過本标準的(de)引用(yòng)而成爲本标準的(de)條款。凡是注日期的(de)引用(yòng)文件，其随後所有的(de)修改單(不包括勘誤的(de)内容)或修訂版均不适用(yòng)于本标準，然而，鼓勵根據本标準達成協議(yì)的(de)各方研究是否可(kě)使用(yòng)這(zhè)些文件的(de)最新版本。凡是不注日期的(de)引用(yòng)文件，其最新版本适用(yòng)于本标準。
GB 4789. 28-1994食品衛生微生物(wù)學檢驗 染色法、培養基和(hé)試劑
GB 9687-1988 食品包裝用(yòng)聚乙烯成型品衛生标準
GB 9688-1988 食品包裝用(yòng)聚丙烯成型品衛生标準
術語和(hé)定義
下(xià)列術語和(hé)定義适用(yòng)于本标準。
3.1
品種 strain
經各種方法分(fēn)離、誘變、雜(zá)交、篩選而選育出來(lái)具特異性、均一(一緻)性和(hé)穩定性的(de)具有同一個(gè)祖先的(de)群體。也(yě)常稱作菌株或品系。
3.2
菌種 pure culture
經人(rén)工培養并可(kě)供進一步繁殖或栽培使用(yòng)的(de)食用(yòng)菌菌絲純培養物(wù)，包括母種、原種和(hé)栽培種。
3.3
母種 stock culture
經各種方法選育得(de)到的(de)具有結實性的(de)菌絲體純培養物(wù)及其繼代培養物(wù)，以玻璃試管爲培養容器和(hé)使用(yòng)單位，也(yě)稱一級種、試管種。
3.4
原種 pre-culture spawn
由母種移植、擴大(dà)培養而成的(de)菌絲體純培養物(wù)。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或 15 cm X28 cm聚丙烯塑料袋爲容器。
3.5栽培種 spawn
由原種移植、擴大(dà)培養而成的(de)菌絲體純培養物(wù)。常以玻璃瓶、塑料瓶或塑料袋爲容器。栽培種隻能用(yòng)于栽培，不可(kě)再次擴大(dà)繁殖菌種。
3.6
種木(mù) wood-pieces
木(mù)塞種用(yòng)的(de)具一定形狀和(hé)大(dà)小的(de)木(mù)質穎粒，也(yě)稱種粒。
3.7
固體培養基 solid medium
以富含木(mù)質纖維素或澱粉類天然碳源物(wù)質爲主要原料，填加适量的(de)有機氮源和(hé)無機鹽類，具一定水(shuǐ)分(fēn)含量的(de)培養基。常用(yòng)的(de)主要原料有木(mù)屑、棉籽殼、稭稈、麥粒、谷粒、玉米粒等，常用(yòng)的(de)有機氮源有麥麸、米糠等，常用(yòng)的(de)無機鹽類有硫酸鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀等。固體培養基包括以闊葉樹木(mù)屑爲主要原料的(de)木(mù)屑培養基、以草(cǎo)本植物(wù)爲主要原料的(de)草(cǎo)料培養基、以禾谷類種子爲主要原料的(de)谷粒培養基、以腐熟料爲原料的(de)糞草(cǎo)培養基，以種木(mù)爲主要原料的(de)木(mù)塞培養基。
3.8
種性 characters of strain
食用(yòng)菌的(de)品種特性，是鑒别食用(yòng)菌菌種或品種優劣的(de)重要标準之一。一般包括對(duì)溫度、濕度、酸堿度 、光(guāng)線和(hé)氧氣的(de)要求，抗逆性、豐産性、出菇遲早、出菇潮數 、栽培周期、商品質量及栽培習(xí)性等農藝性狀 。
4 技術 要求
4.1 技術人(rén)員(yuán)
菌種廠應有與菌種生産所需的(de)相應專業技術人(rén)員(yuán)。
4.2 場(chǎng)地選擇
4.2.1 墓本要求
地勢高(gāo)燥，通(tōng)風良好。排水(shuǐ)暢通(tōng)，交通(tōng)便利。
4.2.2 環境 衛生要求
至少 300 m之内無禽畜舍，無垃圾(糞便)場(chǎng)，無污水(shuǐ)和(hé)其他(tā)污染源(如大(dà)量揚塵的(de)水(shuǐ)泥廠、磚瓦廠、石灰廠、木(mù)材加工廠等)。
4.3 廠房(fáng)設2和(hé)布局
4.3.1 廠房(fáng)設裏和(hé)建造
有各自隔離的(de)攤曬場(chǎng)、原材料庫、配料分(fēn)裝室(場(chǎng))、滅菌室、冷(lěng)卻室、接種室、培養室、貯存室、菌種檢驗室等。廠房(fáng)建造從結構和(hé)功能上滿足食用(yòng)菌菌種生産的(de)基本需要。
4.3.1.1 攤曬場(chǎng)
要求平坦高(gāo)燥、通(tōng)風良好，光(guāng)照(zhào)充足、空曠寬闊。遠(yuǎn)離火源。
4.3.1.2 原材料庫
要求高(gāo)燥、通(tōng)風良好，防雨(yǔ)，遠(yuǎn)離火源。
4.3.1.3 配料分(fēn)裝室(場(chǎng))
要求水(shuǐ)電方便，空間充足。如安排在室外，應有天棚，防雨(yǔ)防曬。
4.3.1.4 滅菌室
要求水(shuǐ)電安全方便，通(tōng)風良好，空間充足，散熱(rè)暢通(tōng)。
4.3.1.5 冷(lěng)卻室
潔淨、防塵、易散熱(rè)。
4.3.1.6 接種室
要設緩沖間，防塵換氣性能良好。内壁和(hé)屋頂光(guāng)滑，經常清洗和(hé)消毒。做(zuò)到空氣潔淨。
4.3.1.7 培養室和(hé)貯存室
内壁和(hé)屋頂光(guāng)滑，便于清洗和(hé)消毒。培養室和(hé)貯存室牆壁要加厚，利于控溫。
4.3.1.8 菌種檢驗室
水(shuǐ)電方便，利于裝備相應的(de)檢驗設備和(hé)儀器。
4.3.2 布 局
應按菌種生産工藝流程合理(lǐ)安排布局。
4.4 設備設施
4.4基本設備
磅秤、天平、高(gāo)壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、淨化(huà)工作台、接種箱、調溫設備、除濕機、培養架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規用(yòng)具，産量大(dà)的(de)菌種廠還(hái)應配備攪拌機、裝瓶裝袋機。高(gāo)壓滅菌鍋應使用(yòng)經有關部門檢驗的(de)安全合格産品。
4.4.2 簽本設施
配料、分(fēn)裝、滅菌、冷(lěng)卻、接種、培養等各環節的(de)設施規模要配套。冷(lěng)卻室、接種室、培養室和(hé)貯存室都要有調溫設施。
4.5 使用(yòng)品種
4.5.1 品種
應使用(yòng)經省級以上農作物(wù)品種審定委員(yuán)會登記的(de)品種，并且清楚種性。不應使用(yòng)來(lái)源和(hé)種性不清的(de)菌種和(hé)生産性狀未經系統試驗驗證的(de)組織分(fēn)離物(wù)作種源生産菌種。并從具相應技術資質的(de)供種單位引種。
4.5.2 移植擴大(dà)
母種僅用(yòng)于移植擴大(dà)原種，一支母種移植擴大(dà)原種不應超過 6瓶(袋);一瓶原種移植擴大(dà)栽培種不應超過 50瓶(袋)。
4.6 生産工藝流程
培養基配制~分(fēn)裝~滅菌~冷(lěng)卻~接種~培養(檢查)~成品。
4.7 生産過程中的(de)技術要求
4.7.1 容器
4.7.1.1 母種
使用(yòng)玻璃試管和(hé)棉塞，試管 18 mm X 180 mm或 20 mm X 200 mm，棉塞要使用(yòng)梳棉，不應使用(yòng)脫月(yuè)旨棉 。
4.7.1.2 原 種
使用(yòng) 650 mL-750 mL，耐 1260C高(gāo)溫的(de)無色或近無色的(de)玻璃菌種瓶，或850 mL耐 1260C高(gāo)溫白色半透明(míng)符合GB 9687衛生規定的(de)塑料菌種瓶，或15 cm X 28 cm耐126'C高(gāo)溫符合GB 9688衛生規定的(de)聚丙烯塑料袋。各類容器都應使用(yòng)棉塞，棉塞應符合 4.7.1.1規定;也(yě)可(kě)用(yòng)能滿足濾菌和(hé)透氣要求的(de)無棉塑料蓋代替棉塞。
4.7.1.3 栽培種
使用(yòng)符合 4.7.1.2規定的(de)容器，也(yě)可(kě)使用(yòng)(17 cm X 35 cm耐 126℃高(gāo)溫符合 GB 9688衛生規定的(de)聚丙烯塑料袋。各類容器都應使用(yòng)棉塞或無棉塑料蓋，并符合 4.7.1.2規定。
4.7.2 培養原料
4.7.2.1 化(huà)學試荊類
這(zhè)類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等，要使用(yòng)化(huà)學純級試劑。
4.7.2.2 生物(wù)制荊和(hé)天然材料類
生物(wù)制劑如酵母粉和(hé)蛋白陳，天然材料如木(mù)屑、棉籽殼、麥教等，要求新鮮、無蟲、無蜻、無黴、潔淨、幹燥 。
4.7.3 培養基配方
4.7.3.1 母種培養基
一般使用(yòng)附錄A中第 A.1章(zhāng)規定的(de)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基((PDA)或第 A.2章(zhāng)規定的(de)綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(CPDA)，特殊種類需加人(rén)其生長(cháng)所需特殊物(wù)質，如酵母粉、蛋白脂、麥芽汁、麥芽糖等，但不應過富。嚴格掌握 pH值。
4.7-3.2 原種和(hé)栽培種培養基
根據當地原料資源和(hé)所生産品種的(de)要求，使用(yòng)适宜的(de)培養基配方(見附錄B)，嚴格掌握含水(shuǐ)量和(hé)pH值。
4.7.4 分(fēn)裝
母種培養基的(de)分(fēn)裝量掌握在試管長(cháng)度的(de)四分(fēn)之一至五分(fēn)之一，滅菌後擺放成的(de)斜面頂端距試管口不少于50 mm，原種和(hé)栽培種培養基裝至距瓶(袋)口不少于 60 mm，滅菌後不少于 45 mm。棉塞大(dà)小松緊要适度。原種和(hé)栽培種培養基的(de)松緊度要一緻。
4.7.5 滅菌
母種的(de)培養基配制分(fēn)裝後應立即滅菌;原種和(hé)栽培種培養基配制後應在4h内進鍋滅菌。母種培養基滅菌0. 11 MPa-0. 12 MPa,30 min，木(mù)屑培養基和(hé)草(cǎo)料培養基滅菌0. 12 MP.,l. 5 h或 0. 14 MPa^0. 15 MPa,l h，谷粒培養基、糞草(cǎo)培養基和(hé)木(mù)塞培養基滅菌0. 14 MPa-0. 15 MPa,2. 5 h。裝容量較大(dà)時(shí)，滅菌時(shí)間要适當延長(cháng)。滅菌完畢後，應自然降壓，不應強制降壓。常壓滅菌時(shí)，在 2h之内使滅菌室溫度達到100 ℃，保持100℃8 h-10 h。母種培養基、原種培養基、谷粒培養基、糞草(cǎo)培養基和(hé)木(mù)塞培養基，應高(gāo)壓滅菌，不應常壓滅菌。滅菌時(shí)應防止棉塞被冷(lěng)凝水(shuǐ)打濕。
4.7.6 滅菌效果的(de)檢查
母種培養基置于28℃恒溫培養，原種和(hé)栽培種培養基經無菌操作接種于GB 4789.28-1994中4.8規定的(de)營養肉湯培養基中，于 28℃恒溫培養，48 h後檢查，無微生物(wù)長(cháng)出的(de)爲滅菌合格。
4.7.7 冷(lěng)卻
冷(lěng)卻室使用(yòng)前要進行清潔和(hé)除塵處理(lǐ)。地面鋪消毒過的(de)塑料薄膜後，将滅菌後的(de)原種瓶(袋)或栽培種瓶(袋)放置在冷(lěng)卻室中冷(lěng)卻到料溫降至适宜溫度。
4.7.8 接種
4.7.8.1 接種室(箱)的(de)墓本處理(lǐ)程序
清潔--搬人(rén)接種物(wù)和(hé)被接種物(wù)--接種室(箱)的(de)消毒處理(lǐ)。
4.7.8.2 接種室(箱)的(de)消毒方法
用(yòng)藥物(wù)消毒并用(yòng)紫外燈照(zhào)射。
4.7.8.3 淨化(huà)工作台的(de)消毒處理(lǐ)方法
先用(yòng)75%酒精或新潔爾滅溶液進行表面擦拭消毒，然後預淨 20 min,
4.7.8.4 接種操作
在無菌室(箱)或淨化(huà)工作台上嚴格按無菌操作接種。接種完成後及時(shí)貼好标簽。
4.7.8.5 接種室(箱)後處理(lǐ) .
接種室每次使用(yòng)後，要及時(shí)清理(lǐ)清潔，排除廢氣，清除廢物(wù)，台面要用(yòng)75%酒精或新潔爾滅溶液擦拭消毒。
4.7.9 培養室處理(lǐ)
在使用(yòng)培養室的(de)前兩天，采用(yòng)藥物(wù)消毒。
4.7-10 培養條件
根據培養物(wù)的(de)不同生長(cháng)要求，給予其适宜的(de)培養溫度(多(duō)在22℃-28℃ )，保持空氣相對(duì)濕度在75%以下(xià)，通(tōng)風，避光(guāng)。
4.7-11 培養期的(de)檢查
各級菌種培養期間應定期檢查，及時(shí)揀出不合格菌種。
4.7-12 入庫
完成培養的(de)菌種要及時(shí)登記入庫。
4.7.13 記錄
生産各環節應詳細記錄。
4.7.14 留樣
各級菌種都應留樣備查，留樣的(de)數量應以每個(gè)批号母種3支~5支，原種和(hé)栽培種 5瓶一7瓶(袋)于 4℃ -6℃下(xià)貯存 ，貯存至使用(yòng)者在正常生産條件下(xià)該批菌種出第一潮菇(耳)。
附 錄 A
(規範性附錄)
母種常用(yòng)培養基及其配方
A.1 PDA培養基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基)
馬鈴薯200 g(用(yòng)浸出汁)，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水(shuǐ)1 000 mL,pH值自然。
A.2 CPDA培養墓(綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養墓)
馬鈴薯200 g(用(yòng)浸出汁)，葡萄糖20 g,磷酸二氫鉀2 g,硫酸鎂0. 5 g,瓊脂20 g，水(shuǐ)1 000 mL,pH值 自然 。
附 錄 B
(規範性附錄)
原種和(hé)栽培種常用(yòng)培養荃配方及其适用(yòng)種類
B.1 以木(mù)屑爲主料的(de)培養基配方
見B. 1. 1, B. 1. 2,B. 1. 3，适用(yòng)于香菇、黑(hēi)木(mù)耳、毛木(mù)耳、平菇、金針菇、滑菇、雞腿菇、真姬菇等多(duō)數木(mù)腐菌類。
B.1.1 闊葉樹木(mù)屑 78%,麸皮 20%，糖 1%，石膏 1%，含水(shuǐ)量 58%士2%0
B.1.2 闊葉樹木(mù)屑 63%，棉籽殼 15%,麸皮20%,糖 1%，石膏 1%，含水(shuǐ)量 58%士2%.
B.1.3 闊葉樹木(mù)屑 63%，玉米芯粉 15%,麸皮20%,糖 l%，石膏 1%，含水(shuǐ)量 58%土2%
B.2 以棉籽殼爲主料的(de)培養基
見B. 2. 1,B. 2. 2,B. 2. 3,B. 2. 4，适用(yòng)于黑(hēi)木(mù)耳、毛木(mù)耳、金針菇、滑菇、真姬菇、楊樹菇、雞腿菇、側耳屬等多(duō)數木(mù)腐菌類。
B. 2. 1 棉籽殼 99%，石膏 l%，含水(shuǐ)量 60%士2%.
B. 2.2 棉籽殼 84%-89%，麥麸 10%-15%.石膏 1%，含水(shuǐ)量 60%士2%
B.2.3 棉籽殼 54%一69 %，玉米芯 20%一30%,麥麸 10%一15%，石膏 1%，含水(shuǐ)量 60%士2%.
B.2.4 棉籽殼 54%-69%，闊葉樹木(mù)屑 20%-30%，麥熬 10%--15%，石膏 1%，含水(shuǐ)量 60%士2%.
B.3 以棉籽殼或稻草(cǎo) 爲主料的(de)培養基
見 6. 3. 1, 6. 3. 2,6- 3. 3，适用(yòng)于草(cǎo)菇。
B. 3.1 棉籽殼 99 %，石灰 100，含水(shuǐ)量 68%士2%。
B.3.2 棉籽殼 84%-89%，麥麸 10%-15%，石灰 1%，含水(shuǐ)量 68%士2%.
B.3.3 棉籽殼 44%，碎稻草(cǎo) 40麥數 15%，石灰 1%，含水(shuǐ)量 68%士2%.
B-4 腐熟料培養基
适用(yòng)于雙孢蘑菇 、大(dà)肥菇、姬松茸等蘑菇屬的(de)種類。
B.4.1腐熟麥稭或稻草(cǎo)(幹)77%腐熟牛糞粉(幹)20%，石膏粉1%碳酸鈣2%，含水(shuǐ)量62%士1%,pH7. 5。
B. 4.2腐熟棉籽殼(幹))97%，石膏粉1%,碳酸鈣2%，含水(shuǐ)量55%士1%,pH7.5。
B. 5 谷粒培養基
小麥、谷子、玉米或高(gāo)粱 97%一98%，石膏 2%-3%，含水(shuǐ)量 50%士1%，适用(yòng)于雙孢蘑菇、大(dà)肥菇、姬松茸等蘑菇屬的(de)種類 ，也(yě)可(kě)用(yòng)于側耳屬各種和(hé)金針菇的(de)原種。
B. 6 以種木(mù)爲主料的(de)培養墓
闊葉木(mù)種木(mù) 70% -75%，附錄 B.1.1配方的(de)培養基 25%-30%,