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檢測實驗室揭開H7N9神秘面紗 病毒8小時(shí)現出原形


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2013年04月(yuè)22日--來(lái)源:網絡--作者:佚名

疾病,PCR,核酸檢測
 太原市疾病預防控制中心的(de)PCR核酸檢測實驗室設置在中心4樓。在進入實驗室前,工作人(rén)員(yuán)需先在更衣室穿上防護衣,戴上口罩帽子和(hé)手套。經過嚴格的(de)防護消毒流程後,記者跟随工作人(rén)員(yuán)進入實驗室的(de)“玻璃屋”。實驗室分(fēn)爲四個(gè)獨立的(de)區(qū)域,分(fēn)别是:試劑準備區(qū)、标本制作區(qū)、擴增區(qū)和(hé)産物(wù)分(fēn)析區(qū)。在試劑準備區(qū),記者看到,工作人(rén)員(yuán)根據不同試劑的(de)屬性,将檢測試劑盒分(fēn)别冷(lěng)藏在2-8攝氏度以及零下(xià)20攝氏度的(de)專用(yòng)冰櫃中。通(tōng)常情況下(xià),檢測試劑在這(zhè)個(gè)區(qū)域内“整裝待發”,并“組裝完成”。在這(zhè)個(gè)區(qū)域配制成功後的(de)試劑,将被通(tōng)過特殊傳送窗(chuāng)口,進入到隔壁的(de)“标本制作區(qū)”。

  标本制作區(qū)是整個(gè)實驗室的(de)核心部位,通(tōng)常情況下(xià),工作人(rén)員(yuán)要在這(zhè)裏将流感病毒的(de)核酸提取出來(lái)。核酸是病毒基因,核酸提取在H7N9禽流感病毒的(de)檢測中是最關鍵一步。工作人(rén)員(yuán)高(gāo)麗介紹:在平日的(de)檢測過程中,檢測員(yuán)會在離心瓶中放入檢測試劑,經過震蕩、離心等一系列複雜(zá)的(de)程序,病毒的(de)核酸便被分(fēn)離出來(lái)。最後,樣本被加入到外形像個(gè)小型洗衣機的(de)“熒光(guāng)定量PCR儀器”中。在擴增區(qū),随著(zhe)儀器的(de)運轉,病毒基因被擴增到了(le)幾百萬個(gè)不等,經過3-5個(gè)小時(shí)後,檢測結果将會顯示在電腦(nǎo)屏幕上,檢測人(rén)員(yuán)就可(kě)以根據曲線圖判斷是否爲H7N9病毒。

  值得(de)一提的(de)是,爲了(le)保證環境清潔,實驗室使用(yòng)單向通(tōng)道,“隻能前進,不能倒退”。當記者提出想返回先前的(de)區(qū)域時(shí),工作人(rén)員(yuán)表示,必須先從出口門出去,再從入口重新進來(lái)。記者看到,每個(gè)實驗區(qū)域都設置了(le)單獨的(de)洗手台和(hé)清潔池。工作人(rén)員(yuán)每進入下(xià)一級區(qū)域,将被要求換上不同顔色的(de)防護服。根據防護級别不同,防護衣分(fēn)爲粉色、綠色和(hé)藍色。“檢測H7N9病毒,從試劑準備到出結果,一般需要8個(gè)小時(shí)左右。”高(gāo)麗參與了(le)前3例的(de)疑似病例排查。她說,爲減少實驗過程中的(de)污染,保證結果精準,整個(gè)檢測過程中,實驗人(rén)員(yuán)被要求全程呆在實驗室。H7N9禽流感病毒檢測需要重複檢測兩次,如果結果相同,再送到省疾控中心實驗室檢測一次,如果結果呈陽性,将被送到中國疾控中心實驗室複核。

  負壓隔離病房(fáng):帶菌空氣特殊處理(lǐ)後排放

  作爲我省首批唯一一所人(rén)感染H7N9禽流感的(de)省市兩級定點救治醫院,太原市第四人(rén)民醫院的(de)重症醫學科已按照(zhào)相關要求:備好32張救治病床,并做(zuò)好了(le)一切救治準備。4月(yuè)15日,本報記者被特許進入該院的(de)負壓隔離病房(fáng)進行探訪。

  重症醫學科被分(fēn)爲清潔區(qū)、潛在污染區(qū)、緩沖間和(hé)隔離病房(fáng)等區(qū)域。在進入隔離病房(fáng)之前,記者被要求不能随意進出,因爲随著(zhe)開關門次數的(de)增多(duō),病房(fáng)内的(de)壓力會即時(shí)發生改變,進而影(yǐng)響到室内空氣質量。在負壓病房(fáng)外,醫院專門設立了(le)緩沖間,“醫務人(rén)員(yuán)在緩沖間要換好N95口罩、穿戴好鞋帽、護目鏡、白色連體防護衣後才進入。”重症醫學科護士長(cháng)張霞說。

  負壓病房(fáng)是世衛組織在規定搶救SARS病人(rén)時(shí)特别強調的(de)一個(gè)重要條件,隻有設置負壓病房(fáng)的(de)醫院,才可(kě)以救治有嚴重呼吸系統傳染病的(de)病人(rén)。

  這(zhè)裏一間負壓隔離病房(fáng)面積約爲18平方米。按照(zhào)救治重症病人(rén)的(de)标準,醫院已在房(fáng)間内配備了(le)有創呼吸機、無創呼吸機、輸液泵、注射泵、吸氧裝置等裝置,“确保重症病人(rén)一來(lái),醫護人(rén)員(yuán)馬上投入搶救。”醫院相關負責人(rén)介紹:“負壓病房(fáng)”意味著(zhe)病房(fáng)的(de)壓力最低。在病房(fáng)開門的(de)瞬間,新鮮空氣會被“壓”進病房(fáng),而病房(fáng)内的(de)空氣卻不會“溜出去”。這(zhè)既保證了(le)給病人(rén)輸送新鮮的(de)空氣,又能防止病房(fáng)内的(de)污染氣體向外倒流。記者發現,隔離病房(fáng)的(de)送風口在病床的(de)上方,出風口在病床一側的(de)牆壁下(xià)方。張霞介紹,之所以這(zhè)樣設計,是爲了(le)讓病人(rén)躺在病床上時(shí),“頭部送來(lái)新風,而呼出的(de)氣體通(tōng)過負壓,從側面的(de)管道裏抽送出去,經過特殊處理(lǐ)後排放。”

  除了(le)大(dà)量的(de)搶救設備以及負壓設計外,記者在隔離病房(fáng)内發現了(le)一個(gè)1平方米大(dà)小的(de)傳遞窗(chuāng)。張霞介紹:病人(rén)救治期間,食物(wù)、藥品等物(wù)品會通(tōng)過傳遞窗(chuāng)消毒後送入病床前,這(zhè)樣可(kě)以避免醫護人(rén)員(yuán)由于傳送物(wù)品而頻(pín)繁進出病房(fáng)所帶來(lái)的(de)污染。病房(fáng)兩側的(de)走廊是雙通(tōng)道設計:工作人(rén)員(yuán)和(hé)醫務人(rén)員(yuán)一個(gè)通(tōng)道,病人(rén)走另外一個(gè)通(tōng)道。病房(fáng)床頭的(de)方桌上,擺放著(zhe)手部消毒液。張霞說,在對(duì)病人(rén)進行救治的(de)過程中,醫護人(rén)員(yuán)被要求随時(shí)用(yòng)消毒液對(duì)手部進行消毒。

  隔離病房(fáng)内設置有單獨的(de)衛生間。據介紹,衛生間的(de)局部壓力要比病房(fáng)低一些,“因爲那裏有病人(rén)的(de)分(fēn)泌物(wù)和(hé)排洩物(wù),壓力低的(de)目的(de)在于:避免污濁的(de)空氣和(hé)病菌外流。”記者在衛生間看到,醫院專爲病人(rén)配備了(le)單獨的(de)洗漱池和(hé)便池,方便病人(rén)使用(yòng)。

  檢測相關程序 讓病毒現出原形

  步驟一:提取樣本

  一旦發現可(kě)疑病例,遍布全省各市的(de)哨點醫院将提取患者的(de)鼻咽拭子或是呼吸道樣本,送往省内15家具有試劑及确診能力的(de)網絡實驗室。

  步驟二:标本處理(lǐ)

  送達的(de)标本将首先拿到生物(wù)安全櫃内進行處理(lǐ),防止标本被外環境污染和(hé)實驗人(rén)員(yuán)被感染。

  工作人(rén)員(yuán)将粘有咽部上皮細胞的(de)棉簽充分(fēn)擠壓,這(zhè)樣細胞才能釋放出來(lái)融入液體内。

  步驟三:提取核酸

  融入細胞的(de)的(de)液體将由工作人(rén)員(yuán)送到一台名爲“核酸提取工作站”的(de)儀器内提取病毒的(de)核酸(DNA)。

  儀器采取磁珠法提取,經過裂解處理(lǐ),磁珠吸附核酸,再将磁珠上的(de)核酸洗出,完成核酸從細胞中提取。

  步驟四:确定病毒

  核酸提取後,對(duì)病毒進行PCR檢測。此前,将進行PCR體系配置:向樣本中添加反應劑,讓病毒“現身”。針對(duì)H7N9病毒檢測,國家下(xià)發的(de)有9種反應劑。如有病毒成分(fēn),起反應時(shí)将被儀器感知。

  體系配置完畢後,與已提取出的(de)核酸融合,通(tōng)過熒光(guāng)定量機檢測,确定是否爲流感,确定是哪類流感。



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