GB 19171- 2003 雙 孢 蘑 菇 菌 種

GB 19171- 2003   雙 孢 蘑 菇 菌 種

前 言

本标準的(de)附錄A、附錄B均爲規範性附錄。

本标準由中華人(rén)民共和(hé)國農業部提出并歸口。

本标準起草(cǎo)單位:福建省輕工業研究所、福建省蘑菇菌種研究推廣站。

本标準主要起草(cǎo)人(rén):王澤生、廖劍華、曾輝、陳軍、陳美(měi)元。

引 言

    栽培雙抱落菇使用(yòng)的(de)菌種是人(rén)工培育的(de)純菌絲體及其培養基的(de)混合體。我國采用(yòng)三級擴大(dà)繁育程序(即母種、原種、栽培種)培育雙抱蘑菇菌種。

爲了(le)規範我國雙抱蘑菇菌種生産、經銷和(hé)使用(yòng)，确保我國雙抱蘑菇生産持續健康發展，特制定本标準。

雙 孢 蘑 菇 菌 種

1 範圍

    本标準規定了(le)雙抱蘑菇(Agaricusbisporus)菌種的(de)質量要求、試驗方法、檢驗規則及标簽、标志、包裝、貯運等。

    本标準适用(yòng)于雙抱蘑菇(Agaricusbisporus)菌種的(de)生産、經銷和(hé)使用(yòng)。

2 規範性引用(yòng)文件

    下(xià)列文件中的(de)條款通(tōng)過本标準的(de)引用(yòng)而成爲本标準的(de)條款。凡是注日期的(de)引用(yòng)文件，其随後所有的(de)修改單(不包括勘誤的(de)内容)或修訂版均不适于本标準，然而，鼓勵根據本标準達成協議(yì)的(de)各方研究是否可(kě)使用(yòng)這(zhè)些文件的(de)最新版本。凡是不注日期的(de)引用(yòng)文件，其最新版本适用(yòng)于本标準。

    GB/T 191 包裝儲運圖示标志(GB/T 191-2000,egv ISO 780;1997)

    GB/T 4789.28 食品衛生微生物(wù)學檢驗 染色法、培養基和(hé)試劑

    GB/T 12728-1991 食用(yòng)菌術語

    GB 19172-2003 平菇菌種

    NY/T 528-2002 食用(yòng)菌菌種生産技術規程

3 術語和(hé)定義

    下(xià)列術語和(hé)定義适用(yòng)于本标準。

3. 1

    原種 pre-culture spawn

    由母種移植、擴大(dà)培養而成的(de)菌絲體純培養物(wù)。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或15 cmX28 cm聚丙烯塑料袋爲容器。

    [NY/T 528-2002，定義3.4〕

3.3

    栽培種 spawn

    由原種移植、擴大(dà)培養而成的(de)菌絲體純培養物(wù)。常以玻璃瓶或塑料袋爲容器。栽培種隻能用(yòng)于栽培，不可(kě)再次擴大(dà)繁殖菌種。

    [NY/T 528-2002，定義3.5」

3.4

   颉颃現象 antagonism

    具有不同遺傳基因的(de)菌落間産生不生長(cháng)區(qū)帶或形成不同形式線行邊緣的(de)現象。

    [GB 19172-2003，定義3.4〕

3.5

    角變 sector

       因菌絲體局部變異或感染病毒而導緻菌絲變細、生長(cháng)緩慢(màn)、菌絲體表面特征成角狀異常的(de)現象。

    [GB 19172-2003，定義3.5]

3.6

    高(gāo)溫抑制級 high temperatured line

    食用(yòng)菌菌種在生産過程中受高(gāo)溫的(de)不良影(yǐng)響，培養物(wù)出現的(de)圈狀發黃(huáng)、發暗或菌絲變稀弱的(de)現象。

    [GB 19172-2003，定義3.6]

3.7

    同工酶 isoenzyme

    催化(huà)相同生化(huà)反應，而結構及理(lǐ)化(huà)性質不同的(de)酶分(fēn)子。通(tōng)過凝膠電泳使同工酶分(fēn)離成遷移率不同的(de)區(qū)帶，經生物(wù)化(huà)學染色後顯示出的(de)同工酶譜，可(kě)對(duì)生物(wù)品種進行酶分(fēn)子水(shuǐ)平的(de)鑒别或鑒定。

3.8

    生物(wù)學效率 biological efficiency

    單位數量培養料的(de)幹物(wù)質與所培養産生出的(de)子實體或菌絲體幹重之間的(de)比率。

    [GB/T 12728-1991，定義2.1.20]

3.9

    種性 characters of variety

    食用(yòng)菌的(de)品種特性是鑒别食用(yòng)菌菌種或品種優劣的(de)重要标準之一。一般包括對(duì)溫度、濕度、酸堿度、光(guāng)線和(hé)氧氣的(de)要求，抗逆性、豐産性、出菇遲早、出菇潮數、栽培周期、商品質量及栽培習(xí)性等農藝

性狀。

    [NY/T 528-2002，定義3.8]

4 質量要求

4.1 母種

4.1.1 容器規格應符合 NY/T 528-2002中4.7.1.1規定。

4.1.2 感官要求應符合表1規定。

         表 1 母種感官要求

4. 1.3 微生物(wù)學要求應符合表2規定。

表 2 母種徽生物(wù)學要求

4. 1.4 菌絲生長(cháng)速度:在PDA培養基上，在适溫(24℃士1℃)下(xià)，15天~20天長(cháng)滿斜面。

4.1.5 母種遺傳和(hé)栽培性狀:供種單位需對(duì)所供母種進行醋酶(Est)同工酶類型鑒定，确認其遺傳類型與對(duì)照(zhào)相同後，再經出菇試驗确證農藝性狀和(hé)商品性狀等種性合格後，方可(kě)用(yòng)于擴大(dà)繁殖或出售。

4.1.5. 1 菌絲體Est同工酶的(de)闆狀聚丙烯酞胺凝膠電泳類型:包括G型(呈現 el,e3特征帶),H型(呈現e2,e4和(hé)e30-e33特征帶)、HG1-HG2型(呈現el,e3,e30-e33特征帶)和(hé) HG4型(呈現el,e2,e3,e4和(hé)e30-e33特征帶)等。以Est區(qū)帶向正極泳動距離與澳酚藍指示劑向正極泳動距離的(de)比值作爲電泳相對(duì)遷移率(R.). el,e2,e3,e4,e30,e31,e32和(hé) e33的(de)Rm值分(fēn)别爲0. 820,0. 810,0. 760,0.750 , 0.128 , 0.100, 0.070和(hé) 0.010,

4. 1.5.2 菌絲萌發、定植與生長(cháng)能力:接種到适合的(de)培養基後，在正常條件下(xià)24 h内萌發，定植迅速、菌絲健壯。

4. 1.5.3 結菇轉潮能力:覆土後 12天~16天結菇，分(fēn)布均勻;18天~22天采菇，每潮菇間

隔7天一10天。

4.1.5.4 生物(wù)學效率:在正常條件下(xià)生物(wù)學效率不低于30a,

4.2 原種

4.2. 1 容器規格應符合NY/T 528-2002中4.7.1.2規定。

4.2.2 感官要求應符合表3規定。

                              表 3 原種感官要求

4.2.3 微生物(wù)學指标應符合表2規定。

4.2.4 菌絲生長(cháng)速度:在适宜培養基上，在适溫(24℃士1℃)下(xià)菌絲長(cháng)滿容器不超過 45天。

4.3 栽培種

4.3. 1 容器規格應符合NY/T 528-2002中4.7.1. 3規定。

4.3.2 感官要求應符合表4規定。

表4 栽培種感官要求

4.3.3 微生物(wù)學指标應符合表2規定。

4.3.4 菌絲生長(cháng)速度:在适宜培養基上，在适溫(24℃士1℃)下(xià)菌絲長(cháng)滿瓶(袋)不超過45天。

5 抽樣

5. 1 質檢部門的(de)抽樣應具有代表性。

5.2 母種按品種、培養條件、接種時(shí)間分(fēn)批編号，原種、栽培種按菌種來(lái)源、制種方法和(hé)接種時(shí)間分(fēn)批編号。按批随機抽取被檢樣品。

5.3 母種、原種、栽培種的(de)抽樣量分(fēn)别爲該批菌種量的(de)100/a,5% ,10/a。但每批抽樣數量不得(de)少于10支(瓶、袋);超過100支(瓶、袋)的(de)，可(kě)進行兩級抽樣。

6 試驗方法

6.1 感官檢驗

    按表 5逐項進行。

表5 感官檢驗方法

62 微生物(wù)學檢驗

6.21 表2中菌絲和(hé)雜(zá)菌用(yòng)放大(dà)倍數不低于10x40 的(de)光(guāng)學顯微鏡對(duì)培養物(wù)的(de)水(shuǐ)封片進行觀察，每一檢樣應觀察不少于50個(gè)視野。

6.22 細菌檢驗:取少量疑有細菌污染的(de)培養物(wù)，按無菌操作接種于GB/T4789.28中4.8規定的(de)營養肉湯培養液中，25℃一28℃振蕩培養1天一2天，觀察培養液是否混濁。培養液混濁，爲有細菌污染;培養液澄清，爲無細菌污染。

6.2.3 黴菌檢驗:取少量疑有黴菌污染的(de)培養物(wù)，按無菌操作接種于 PDA培養基(見附錄A)中，25℃~28℃培養3天~4天，出現雙抱蘑菇菌落以外的(de)菌落，或有異味者爲黴菌污染物(wù)，必要時(shí)進行水(shuǐ)封片鏡檢。

6.3 菌絲生長(cháng)速度

6.3.1 母種:PDA培養基，在24℃士1℃下(xià)培養，計算(suàn)長(cháng)滿需天數。

6.3.2 原種和(hé)栽培種:采用(yòng)第B.1章(zhāng)或第B.2章(zhāng)規定的(de)配方之一，在24℃士1℃下(xià)培養，計算(suàn)長(cháng)滿需天數。

6.4 母種遺傳和(hé)栽培性狀

6.4.1 菌絲體Est同工酶的(de)闆狀聚丙烯酞胺凝膠電泳:取菌齡爲15天~20天的(de)試管母種，刮取菌絲，按1：3：0.5的(de)比例混合菌絲(g)、0.lmol/L磷酸緩沖液(mL)和(hé)石英砂(g)，研磨成勻漿，台式離心機10000r/min離心5min，取上清液，按5:1:1的(de)比例混合上清液、40%蔗糖和(hé)。0.01%溴酚藍溶液作爲電泳樣品，4℃下(xià)冷(lěng)藏備用(yòng)。采用(yòng)聚丙烯酞胺凝膠電泳。用(yòng)pH8.9Tris一HCI緩沖液配制9%分(fēn)離膠，用(yòng)pH8.3Tris一甘氨酸作電極緩沖液。點樣7μL，3℃下(xià)120V電泳20min後穩壓200V，4h。用(yòng)固藍RR鹽6omg，0.lmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)80mL，α一萘乙酯38mg和(hé)β-萘乙酯38mg溶于3mL丙酮配制的(de)染色液，染色，顯現酶譜，再根據特征帶分(fēn)型。

6.42 栽培性狀:使用(yòng)附錄B中B.2.1培養基按表6各項觀察記錄。

6.4.2.1 菌絲萌發、定植與生長(cháng)能力:接種到附錄B中B.2.1培養基(含水(shuǐ)量提高(gāo)到68%)上，在适溫(24℃士1℃)下(xià)培養，肉眼觀察菌絲萌發、定植與生長(cháng)情況。

6.4.2.2 結菇轉潮能力:栽培試驗，肉眼觀察，計算(suàn)覆土到出第一潮菇的(de)時(shí)間。

6.4.2.3 生物(wù)學效率:栽培試驗，記錄、統計産量，按GB/T12728一1991中2.120規定計算(suàn)。

6.4.2.4 栽培試驗:将被檢母種制成原種。采用(yòng)附錄B中B.2.1的(de)培養基配方(含水(shuǐ)量提高(gāo)到68%)，

配制360 kg培養基，接種後分(fēn)三組(每組2㎡)進行常規管理(lǐ)，根據表6所列項目，做(zuò)好栽培記錄，統計檢驗結果。同時(shí)将該母種的(de)出發菌株設爲對(duì)照(zhào)，亦做(zuò)同樣處理(lǐ)。對(duì)比二者的(de)檢驗結果，以時(shí)間計的(de)檢驗項目中，被檢母種的(de)任何一項時(shí)間較對(duì)照(zhào)菌株推遲5天以上(含5天)者，爲不合格;産量顯著低于對(duì)照(zhào)菌株者，爲不合格;菇體外觀形态與對(duì)照(zhào)明(míng)顯不同或畸形者，爲不合格。

                         表 6 母種栽培中農藝性狀和(hé)商品性狀檢驗記錄

6.5 留樣

    各級菌種都要留樣備查，留樣的(de)數量應每個(gè)批号菌種((3~5)支(瓶、袋)，于4℃-6℃下(xià)貯存，母種5個(gè)月(yuè)，原種4個(gè)月(yuè)，栽培種 2個(gè)月(yuè)。

7 檢驗規則

    判定規則按質量要求進行。檢驗項目全部符合質量要求時(shí)，爲合格菌種，其中任何一項不符合要求，均爲不合格菌種。

8 标簽、标志、包裝、運輸、貯存

8. 1 标簽、标志

8. 1.， 産品标簽

    每支(瓶、袋)菌種必須貼有清晰注明(míng)以下(xià)要素的(de)标簽:

    a) 産品名稱(如:雙抱蘑菇母種);

    b) 品種名稱(如:As2796);

    c) 生産單位(XXX菌種廠);

    d) 接種日期(如:2000.XX.XX);

    e) 執行标準。

8.1.2 包裝标簽

    每箱菌種必須貼有清晰注明(míng)以下(xià)要素的(de)包裝标簽:

a)       産品名稱、品種名稱;

    b) 廠名、廠址、聯系電話(huà);

    c) 出廠日期;

    d 保質期、貯存條件;

    e) 數量;

    f) 執行标準。

8. 1.3 包裝儲運圖示

    按GB/T 191規定，應注明(míng)以下(xià)圖示标志:

    a) 小心輕放标志;

    b) 防水(shuǐ)、防潮、防凍标志;

    c) 防曬、防高(gāo)溫标志;

    d) 防止倒置标志;

    e) 防止重壓标志。

8.2 包裝

8.2.1 母種外包裝采用(yòng)木(mù)盒或有足夠強度的(de)紙材制做(zuò)的(de)紙箱，内部用(yòng)棉花、碎紙、報紙等具有緩沖作用(yòng)的(de)輕質材料填滿。

8.2.2 原種、栽培種外包裝采用(yòng)有足夠強度的(de)紙材制做(zuò)的(de)紙箱，菌種間用(yòng)碎紙、報紙等具有緩沖作用(yòng)的(de)輕質材料填滿。紙箱上部和(hé)底部用(yòng)8 cm寬的(de)膠帶封口，并用(yòng)打包帶捆紮兩道，箱内附産品合格證書(shū)和(hé)使用(yòng)說明(míng)(包括菌種種性、培養基配方及适用(yòng)範圍)。

8.3 運輸

8.3. 1 不得(de)與有毒物(wù)品混裝。

8.3.2 氣溫達30℃以上時(shí)，需用(yòng)20C-20℃的(de)冷(lěng)藏車運輸。

8.3.3 運輸中必須有防震、防曬、防塵、防雨(yǔ)淋、防凍、防雜(zá)菌污染的(de)措施。

8.4 貯存

8.4.1 母種在5℃士1℃下(xià)貯存，貯存期不超過90天。

8.4.2 原種應盡快(kuài)使用(yòng)，10天内可(kě)在溫度24℃士1℃、清潔、通(tōng)風、幹燥(相對(duì)濕度50%~75%),避光(guāng)的(de)室内存放。一般在5℃士1℃下(xià)貯存，貯存期不超過40天。

8.4.3 栽培種應盡快(kuài)使用(yòng)，在溫度24℃士1℃、清潔、通(tōng)風、幹燥(相對(duì)濕度50%~75%),避光(guāng)的(de)室内存放谷粒種不超過10天，其餘培養基的(de)栽培種不超過20天。在5℃士1℃下(xià)可(kě)貯存 90天。

    附 錄 A

  (規範性附錄)

PDA培養基配方

馬鈴落200 g(取用(yòng)浸出液)，葡萄糖20 g,瓊脂20 g，水(shuǐ)1 000 mL,pH值自然。

            附 錄 B

          (規範性附錄)

常用(yòng)原種和(hé)栽培種培養墓及其配方

B. 1 谷粒種培養基

谷粒98%，石膏粉2%，含水(shuǐ)量50%士1%,pH7. 5-8.0,

B.2 腐熟料種培養基

B. 2. 1 腐熟糞草(cǎo)種培養墓

    腐熟麥稈或稻稈(幹)77%,腐熟牛糞粉(幹)20%，石膏粉 1%,碳酸鈣 2%，含水(shuǐ)量 62%士1%,pH7.5.

B. 22 腐熟棉籽殼種培養墓

    腐熟棉籽殼(幹)97%，石膏粉1%，碳酸鈣2%，含水(shuǐ)量55%士1%,pH7.5,